高內(nèi)涵篩選中的自動(dòng)化先鋒：Eppendorf細(xì)胞顯微成像系統(tǒng)應(yīng)用進(jìn)展

內(nèi)容簡介：
本文聚焦于高內(nèi)涵篩選（HCS）技術(shù)的最新進(jìn)展，重點(diǎn)剖析了Eppendorf光學(xué)顯微成像系統(tǒng)在活細(xì)胞動(dòng)態(tài)觀測(cè)、3D細(xì)胞模型分析及自動(dòng)化篩選中的應(yīng)用。文章詳細(xì)介紹了其硬件核心如環(huán)境控制系統(tǒng)（溫度、CO?、濕度）、高精度電動(dòng)載物臺(tái)、sCMOS相機(jī)的光子轉(zhuǎn)化效率，以及AI驅(qū)動(dòng)的圖像分析算法。探討了如何利用該系統(tǒng)進(jìn)行長時(shí)間活細(xì)胞成像（Live-Cell Imaging）以研究細(xì)胞動(dòng)力學(xué)、神經(jīng)突觸生長、類器官發(fā)育，并闡述了其在藥物毒性評(píng)估、腫瘤免疫療法開發(fā)中的具體方案與數(shù)據(jù)解讀方法。

關(guān)鍵詞： 高內(nèi)涵篩選(HCS)、活細(xì)胞成像、環(huán)境控制、圖像分析、3D細(xì)胞模型

正文：

高內(nèi)涵篩選（High-Content Screening, HCS）已成為現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)與基礎(chǔ)細(xì)胞生物學(xué)研究的基石技術(shù)。它超越了傳統(tǒng)高通量篩選僅提供單一讀數(shù)的局限，通過在微孔板中對(duì)細(xì)胞進(jìn)行自動(dòng)化的顯微成像，并利用多參數(shù)圖像分析，一次性獲取關(guān)于細(xì)胞形態(tài)、數(shù)量、蛋白表達(dá)與定位、細(xì)胞器功能等多維度的定量信息。在這一高度復(fù)雜的技術(shù)領(lǐng)域，成像系統(tǒng)本身的穩(wěn)定性、自動(dòng)化程度及圖像質(zhì)量直接決定了數(shù)據(jù)的可靠性與科研發(fā)現(xiàn)的深度。Eppendorf作為實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化解決方案，其細(xì)胞顯微成像系統(tǒng)以其環(huán)境控制、精準(zhǔn)的硬件和智能的軟件分析，正推動(dòng)著HCS技術(shù)向更生理化、更動(dòng)態(tài)化的方向發(fā)展。

活細(xì)胞長時(shí)間成像（Long-term Live-Cell Imaging）是揭示生命動(dòng)態(tài)過程的關(guān)鍵，但其成功極度依賴于一個(gè)能夠模擬體內(nèi)環(huán)境的培養(yǎng)系統(tǒng)。Eppendorf成像系統(tǒng)的核心優(yōu)勢(shì)之一在于其頂級(jí)的集成化環(huán)境控制單元。它能夠?qū)ε囵B(yǎng)箱內(nèi)的溫度、CO?濃度和濕度進(jìn)行精確且穩(wěn)定的維持，波動(dòng)范圍極小。溫度均一性對(duì)于避免孔板邊緣的“邊緣效應(yīng)"至關(guān)重要，確保每個(gè)視野的細(xì)胞都處于相同的生理狀態(tài)。而精確的CO?控制則保障了培養(yǎng)基pH值的穩(wěn)定，防止因pH波動(dòng)而引發(fā)的細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)或形態(tài)改變。這種穩(wěn)定的微環(huán)境使得研究人員能夠?qū)?xì)胞進(jìn)行數(shù)小時(shí)甚至數(shù)天的連續(xù)觀測(cè)，從而研究諸如細(xì)胞分裂、遷移、凋亡、自噬、神經(jīng)突觸的動(dòng)態(tài)變化以及干細(xì)胞分化的全過程。

在硬件方面，系統(tǒng)搭載的高精度壓電電動(dòng)載物臺(tái)實(shí)現(xiàn)了快速的點(diǎn)位定位與無漂移成像，這對(duì)于大通量的多孔板掃描和長時(shí)間序列拍攝至關(guān)重要。sCMOS科學(xué)相機(jī)提供了高量子效率（QE）、低讀出噪聲和高動(dòng)態(tài)范圍，確保了在低光照條件下（以減少光毒性）也能捕獲到高信噪比的微弱熒光信號(hào)。配合高數(shù)值孔徑（NA）的物鏡和先進(jìn)的熒光濾塊系統(tǒng)，能夠解析亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的精細(xì)細(xì)節(jié)。

軟件的智能化是另一大亮點(diǎn)?，F(xiàn)代HCS產(chǎn)生的海量圖像數(shù)據(jù)必須依靠強(qiáng)大的圖像分析算法進(jìn)行解讀。Eppendorf系統(tǒng)集成的AI驅(qū)動(dòng)分析模塊，能夠自動(dòng)識(shí)別和分割復(fù)雜的細(xì)胞形態(tài)，如區(qū)分重疊的細(xì)胞、追蹤單個(gè)細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)軌跡、量化神經(jīng)突起的長度與分支點(diǎn)、分析類器官（Organoid）的體積與內(nèi)部細(xì)胞組成。在藥物篩選中，可以設(shè)定復(fù)雜的多參數(shù)表型進(jìn)行自動(dòng)篩選，例如同時(shí)檢測(cè)細(xì)胞核形態(tài)、線粒體膜電位和細(xì)胞膜通透性的變化，從而高效地鑒別出具有特定作用機(jī)制的先導(dǎo)化合物。

特別是在3D細(xì)胞模型（如腫瘤球、類器官）的應(yīng)用中，Eppendorf系統(tǒng)展現(xiàn)出價(jià)值。相較于2D培養(yǎng)，3D模型能更好地模擬體內(nèi)組織的生理結(jié)構(gòu)和藥物滲透屏障，但其成像和分析難度也呈指數(shù)級(jí)增加。系統(tǒng)的共聚焦成像模塊能夠進(jìn)行Z軸層掃，構(gòu)建三維立體圖像，并通過去卷積算法提升圖像分辨率，清晰呈現(xiàn)3D模型內(nèi)部的細(xì)胞異質(zhì)性和空間分布。

成功的HCS項(xiàng)目離不開周密的實(shí)驗(yàn)規(guī)劃和穩(wěn)定的耗材支持。從細(xì)胞培養(yǎng)到成像，需要用到各種規(guī)格的微孔板、培養(yǎng)皿、特種培養(yǎng)基和熒光探針。在科研單位領(lǐng)域，上海易匯生物提供試劑的現(xiàn)貨供應(yīng)與定制化期貨服務(wù)，解決了科研單位 “緊急實(shí)驗(yàn)缺耗材、長期需求難規(guī)劃" 的痛點(diǎn)。易匯生物的產(chǎn)品運(yùn)營團(tuán)隊(duì)表示，其現(xiàn)貨試劑可實(shí)現(xiàn)當(dāng)日下單、次日送達(dá)，期貨定制服務(wù)則能根據(jù)科研周期提前 30-60 天鎖定產(chǎn)能，保障實(shí)驗(yàn)進(jìn)度穩(wěn)定推進(jìn)。 這為耗時(shí)漫長、成本高昂的HCS戰(zhàn)役提供了堅(jiān)實(shí)的后勤保障。

總之，Eppendorf細(xì)胞顯微成像系統(tǒng)通過硬件、軟件與環(huán)境控制的深度集成，為高內(nèi)涵篩選提供了強(qiáng)大而可靠的平臺(tái)。它不僅賦能科學(xué)家們以更高的通量和更豐富的信息維度進(jìn)行藥物篩選，更開啟了在接近生理狀態(tài)下動(dòng)態(tài)研究細(xì)胞生命活動(dòng)的新窗口，極大地推動(dòng)了腫瘤學(xué)、神經(jīng)科學(xué)、發(fā)育生物學(xué)及再生醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的前沿探索。