細胞電轉染技術突破難轉染細胞基因遞送瓶頸

內(nèi)容簡介：
本文重點介紹Bio-Rad Gene Pulser Xcell電轉染系統(tǒng)在難轉染細胞中的應用突破。系統(tǒng)分析方波脈沖、指數(shù)衰減波等不同波形參數(shù)對轉染效率的影響，探討其在原代細胞、干細胞和懸浮細胞轉染中的優(yōu)化策略。

正文：
電轉染技術通過瞬時電脈沖在細胞膜上形成可逆孔隙，實現(xiàn)基因物質(zhì)的高效遞送。Bio-Rad Gene Pulser Xcell系統(tǒng)提供方波和指數(shù)衰減波兩種脈沖模式，可精確控制電壓、脈沖時長和脈沖次數(shù)等參數(shù)。

在技術參數(shù)優(yōu)化方面，研究發(fā)現(xiàn)：對于懸浮細胞（如Jurkat），采用指數(shù)衰減波（250V，950μF）可獲得>80%轉染效率；對于貼壁細胞（如原代神經(jīng)元），方波脈沖（100V，30ms）效果更佳；對于難轉染的干細胞，采用多脈沖方波（5×20ms，100V）可顯著提高轉染效率同時保持細胞活力。

系統(tǒng)配備的PC控制軟件包含超過100種細胞類型的預設程序，并可記錄用戶自定義方案。阻抗檢測功能可實時監(jiān)測電轉過程，自動調(diào)整脈沖參數(shù)。實驗數(shù)據(jù)顯示，相比脂質(zhì)體轉染，電轉染的效率提高3-5倍，特別是在原代T細胞轉染中，效率從20%提升至90%以上。

在CAR-T細胞治療研究中，采用優(yōu)化后的電轉染方案，CAR基因轉染效率達95%，細胞存活率>85%，臨床級細胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)要求。

關鍵詞： 電轉染、難轉染細胞、脈沖優(yōu)化、原代細胞、基因遞送